小鼠骨髓巨噬细胞提取。
·安乐死处死小鼠后酒精浸泡5min。
·沿小鼠踝关节环形剪开皮肤,从踝关节处向上分离皮肤至大转子,背侧同上,向上分离皮肤至大转子。
·充分暴露大腿和小腿(此处注意保留全部肌肉),充分剔除周围血管、筋膜等。
·找到髋关节,于髋关节上剪断,于踝关节之下剪断,注意保留踝关节、膝关节和髋关节。
·秒取材后置于盛满酒精的培养血中浸泡15秒,后转至泡满DMEM的培养基中室温保存。
·小心剔除胫骨和股骨周围的肌肉(注意不可折断关节处),剪去胫骨和股骨两端。
·用盛有DMEM的注射器冲洗出细胞,反复多次直到培养基澄清。
·收集培养液,70um筛网过滤后600g,4°C,离心5min。
·弃上清,加入1毫升裂红液,室温下孵育3min。
·后加入10mlDMEM终止裂红600g,离心5min。
·后加入8毫升DMEM送入恒温箱孵育。